Introdução

O uso de desinfetantes como agentes para controlar a contaminação microbiológica de um ambiente está bem estabelecido e é regido por órgãos reguladores na Europa e nos Estados Unidos.

O Regulamento Europeu de Produtos Biocidas (BPR) 528/2012 [1] aborda o marketing e o uso de produtos biocidas na Europa. Os desinfetantes químicos nos Estados Unidos são registrados e regulamentados pela Agência de Proteção Ambiental dos EUA (EPA) sob a Lei Federal de Inseticidas, Fungicidas e Rodenticidas (FIFRA) (CFR 40, partes 150-189) [2]. De acordo com a FIFRA, os desinfetantes químicos são considerados "pesticidas antimicrobianos".

Dados que demonstram a alegação de eficácia de um desinfetante, seja ele bactericida, fungicida, esporicida ou virucida, é um requisito claro do BPR ou da EPA para um fabricante de desinfetante obter o registro.

Para usuários finais de desinfetantes no setor farmacêutico, os regulamentos também declaram a necessidade de demonstrar a eficácia do desinfetante. A orientação da Food and Drug Administration (FDA) dos EUA para a indústria farmacêutica declara "A adequação, eficácia e limitações dos agentes e procedimentos desinfetantes devem ser avaliadas. A eficácia desses desinfetantes e procedimentos deve ser avaliada por sua capacidade de garantir que os contaminantes potenciais sejam adequadamente removidos das superfícies" [3]. Na Europa, requisitos semelhantes são fornecidos pela Comissão Europeia, "4.37 O processo de desinfecção deve ser validado. Os estudos de validação devem demonstrar a adequação e eficácia dos desinfetantes na maneira específica em que são usados ​​e devem apoiar os períodos de validade em uso das soluções preparadas." [4].

Métodos para demonstrar a eficácia

Na Europa, a Norma Europeia (EN) 14885:2018 [5] fornece referências aos métodos de teste exigidos (normas EN) a serem utilizados ​​pelos fabricantes de desinfetantes para apoiar as alegações de atividade microbiocida. Nos Estados Unidos, a Diretriz de Teste de Desempenho do Produto da EPA, OCSPP 810.2100 [6], descreve os métodos de teste (métodos da Association of Official Analytical Chemists (AOAC)) a serem usados pelos fabricantes de desinfetantes para apoiar alegações de atividade microbiocida.

Os tipos de teste podem ser divididos em duas categorias:

1. Teste de suspensão
   Por exemplo, EN 1276 Desinfetantes e antissépticos químicos. Teste quantitativo de suspensão para avaliação da atividade bactericida de desinfetantes químicos e antissépticos utilizados nas áreas alimentar, industrial, doméstica e institucional. Método de teste e requisitos (fase 2, etapa 1).
   
   EN 1650 Desinfetantes químicos e antissépticos. Teste quantitativo de suspensão para avaliação da atividade fungicida de desinfetantes químicos e antissépticos utilizados nas áreas alimentar, industrial, doméstica e institucional. Método de teste e requisitos (fase 2, etapa 1).
   
   Método oficial da AOAC 955.15 Teste de desinfetantes contra Staphylococcus aureus, método de diluição-uso.
   
   
2. Teste de superfície
   Por exemplo, EN 13697 Desinfetantes químicos e antissépticos — Teste quantitativo de superfície não porosa para avaliação de atividade bactericida e/ou fungicida de desinfetantes químicos usados ​​nas áreas alimentar, industrial, doméstica e institucional — Método de teste e requisitos sem ação mecânica (fase 2, etapa 2).
   
   Método oficial da AOAC 961.02 Produtos germicidas em spray como desinfetantes.

Os diferentes métodos de teste usam inóculo inicial, organismos, reduções logarítmicas e tempos de contato específicos.

Para fazer declarações sobre desinfetantes na Europa, os fabricantes de desinfetantes geralmente realizam os testes EN e os números do teste EN podem ser fornecidos nos rótulos do produto, junto com os tempos de contato padrão especificados no método. Os métodos de teste padrão são normalmente usados ​​porque são robustos, reproduzíveis e bem reconhecidos. Também pode ser útil para os usuários finais poderem consultar os resultados dos testes de método padrão para permitir que comparem produtos de diferentes fabricantes.

Para um usuário final de um desinfetante, os métodos de teste padrão podem não refletir com precisão as condições em sua própria sala limpa farmacêutica. Os usuários finais normalmente terão diferentes materiais de superfície em suas salas limpas, diferentes micro-organismos presentes e diferentes condições ambientais (como baixa umidade, secagem rápida graças aos sistemas HVAC).

A United States Pharmacopoeia (USP), capítulo <1072> [7] fornece mais orientações sobre testes de eficácia para o setor farmacêutico, declarando "Para demonstrar a eficácia de um desinfetante em um ambiente de fabricação de produtos farmacêuticos, pode ser necessário realizar os seguintes testes: (1) testes de diluição-uso (triagem de desinfetantes quanto à sua eficácia em várias concentrações e tempos de contato com base em uma ampla gama de organismos de teste padrão e isolados ambientais); (2) Testes de superfície de desinfetante (usando microrganismos de teste padrão e microrganismos que são isolados ambientais típicos, aplicando desinfetantes em superfícies na concentração de uso selecionada com um tempo de contato especificado e determinando a redução logarítmica dos microrganismos provocados); e (3) uma comparação estatística da frequência de isolamento de microrganismos isolados antes e depois da implementação de um novo desinfetante.

Isso é considerado necessário porque as etapas críticas do processo, como desinfecção de áreas de processamento asséptico, conforme exigido pelos regulamentos de boas práticas de produção, precisam ser validadas e os requisitos de registro da EPA não abordam como os desinfetantes são realmente usados ​​nas indústrias farmacêutica, biotecnológica e de dispositivos médicos.

De acordo com as orientações da USP, é relativamente fácil usar diferentes microrganismos e superfícies de teste com métodos de teste padrão. No entanto, atingir os tempos de contato especificados dos métodos de teste padrão pode ser um desafio dentro das condições ambientais de uma sala limpa farmacêutica. A taxa de evaporação de um desinfetante utilizado em uma superfície em uma sala limpa com uma alta taxa de troca de ar pode ser significativamente diferente da taxa de evaporação em condições de laboratório. Isso levanta questões quanto à necessidade de umedecer visivelmente a superfície com desinfetante pelo período de tempo especificado para atingir a eficácia e, portanto, qual é exatamente a expectativa de tempo de contato.

Definições de tempo de contato

Para determinar se é um requisito regulatório do setor farmacêutico que as superfícies permaneçam visivelmente úmidas durante o tempo de contato (doravante denominado "tempo de contato úmido"), foi realizada uma revisão dos regulamentos.

As diretrizes de boas práticas de produção dos EUA [3],[8], UE [4] e o programa de cooperação na inspeção farmacêutica [9] não definem o "tempo de contato". A European Pharmacopoeia (EP) não fornece nenhuma orientação sobre testes de eficácia de desinfetantes. Por outro lado, o capítulo 1072 [7] da USP usa o termo "tempo de contato" com frequência, mas não detalha seu significado na seção de definições do capítulo. A norma ISO para sala limpa (ISO 14644 parte 5 [10]) também não fornece nenhuma definição.

Como os regulamentos do setor farmacêutico não fornecem um significado claro, uma pesquisa mais ampla de outros documentos regulatórios aplicáveis ​​e orientações reconhecidas da indústria farmacêutica foi realizada.

A Royal Pharmaceutical Society/NHS Pharmaceutical Quality Assurance Committee fornece orientação sobre a aplicação de desinfetantes e estabelece que "deve-se evitar o acúmulo de quantidades excessivas de agentes de limpeza e desinfecção. Idealmente, as superfícies devem estar secas 1 hora após a aplicação. Por outro lado, produto suficiente deve permanecer para atingir a eficácia necessária ao longo do tempo de contato recomendado, ou seja, os desinfetantes não devem ser espalhados em uma camada muito fina" [11]. Essa declaração infere uma expectativa de que é necessário um tempo de contato úmido para atingir a eficácia.

Os métodos EN e AOAC não especificam um "tempo de contato úmido". Em testes de suspensão, um "tempo de contato úmido" sempre é usado, pois o teste envolve a adição do produto desinfetante para uma suspensão de organismo mantida em solução pelo tempo de contato necessário, com o produto neutralizante adicionado ao final desse tempo de contato.

No entanto, não é tão claro para testes de superfície, já que uma quantidade de desinfetante, conforme definido pela norma, é pipetada na superfície sem espalhar. Devido aos pequenos volumes que são pipetados e da tensão superficial relativamente alta da maioria dos desinfetantes testados, é provável que um tempo de contato úmido seja alcançado em condições de laboratório.

O teste de superfície EN com ação mecânica, EN 16615 [12], fornece o método de teste mais próximo do uso prático de desinfetantes porque incorpora a ação de limpeza do desinfetante em uma superfície. Na seção Condições Experimentais, são fornecidas as seguintes informações sobre tempo de contato: "Os tempos de contato para desinfetantes de superfície são escolhidos com base nas condições práticas do produto. O tempo de contato recomendado para utilização do produto é responsabilidade do fabricante." Pode-se deduzir do texto "condições práticas do produto" que se referem a volumes aplicados por esfregão ou pano de limpeza e taxas de evaporação, por exemplo, um álcool em comparação com um composto de amônio quaternário, mas, repetimos, esta não é uma definição clara.

A monografia técnica 20 da Pharmaceutical and Healthcare Sciences Society (PHSS) fornece as seguintes informações na seção 3.3.4 "As lâminas são expostas a desinfetante pelo tempo de contato úmido/de residência definido" [13]. Esta é uma afirmação clara de que o tempo de contato é úmido.

A diretriz [14] dos Centros para Controle e Prevenção de Doenças (CDC) dos Estados Unidos fornece a seguinte definição de tempo de contato no glossário: "Tempo pelo qual um desinfetante está em contato direto com a superfície ou item a ser desinfetado. Para a desinfecção de superfícies, esse período é delimitado pela aplicação na superfície até que ocorra a secagem completa." Essa definição também afirma claramente um tempo de contato úmido.

A Diretriz de Teste de Desempenho do Produto, OCSPP 810.2000 [15], fornece a seguinte informação sobre tempo de contato: “O tempo de contato utilizado no teste de eficácia deve ser o mesmo ou menor que o tempo de contato identificado no rótulo do produto. Se um tempo de contato for diferente do intervalo identificado no método de teste ou se a diretriz for preferível, é recomendável consultar a agência antes do teste e uma modificação na abordagem padrão pode ser necessária. Na maioria dos casos, uma modificação para fornecer um período de exposição mais longo é limitada pelas considerações práticas dos padrões de uso (por exemplo, um período de exposição de >10 min. para um produto que provavelmente evaporará da superfície tratada dentro 10 min.). Identifique e justifique claramente todas as modificações do método no protocolo de teste. Para produtos líquidos ou em spray que contenham ingredientes ativos voláteis onde o produto é aplicado em uma superfície dura não porosa, o tempo máximo de contato pode ser determinado inspecionando visualmente a evaporação durante o período de contato proposto." Mais uma vez, essa afirmação indica claramente uma expectativa de tempo de contato úmido.

O relatório técnico da PDA 70 [16] fornece a seguinte definição de glossário: "A quantidade mínima de tempo que um higienizador, desinfetante ou esporicida deve ser deixado em contato completo (úmido) com a superfície a ser tratada para ser eficaz." Essa definição afirma claramente um tempo de contato úmido.

O Guia para o uso de desinfetantes da Pharmig [17] fornece o seguinte texto: "A evaporação mais rápida do desinfetante pode ocorrer em superfícies quentes ou onde a superfície tratada está sujeita a condições de baixa umidade ou de alto fluxo de ar, às vezes encontradas em operações de sala limpa." Essa declaração infere uma expectativa de que é necessário um tempo de contato úmido para atingir a eficácia.

A partir da revisão acima de publicações respeitadas da indústria farmacêutica, a necessidade de tempo de contato úmido é mais clara.

Não é inconcebível que haja uma continuação da eficácia desinfetante depois que a superfície estiver visivelmente seca, já que a ação ocorre em nível celular. A primeira fase da eliminação de micróbios é a absorção do ingrediente ativo do desinfetante pela célula. Pode-se, portanto, considerar que há dois "tempos" em jogo durante a desinfecção (Figura 1).

Conclusão

Para demonstrar a eficácia, um fornecedor de desinfetante deve realizar testes padrão em condições repetíveis, a partir dos quais definirá um tempo de contato. Esse tempo de contato pode ser útil para o usuário final na seleção do desinfetante adequado.

Um usuário final também deve validar a eficácia do desinfetante, refletindo as condições de uso dentro de suas instalações, incluindo a definição de um tempo de contato utilizado na prática.

A maioria das organizações de orientação farmacêutica define o tempo de contato como um tempo de contato úmido.

Existem apenas estudos limitados publicados para investigar o desempenho do desinfetante após as superfícies estarem visivelmente secas. Também é impossível medir na prática, já que o usuário não pode observar a morte celular como um ponto final.

Para facilitar testes do usuário final que sejam representativos das condições das instalações, o usuário final é incentivado a medir o tempo que leva para os desinfetantes evaporarem quando aplicados usando técnicas de rotina (aplicar com pano/esfregar) e usar esse tempo de contato para estudos de laboratório.

Referências:

1. Regulation (Eu) no. 528/2012 of the European Parliament and of the Council of 22 May 2012 Concerning the Making Available on the Market and Use of Biocidal Products
2. Title 40 of the Code of Federal Regulations (40 CFR) Subchapter E Pesticide Programs Parts 150-189
3. FDA Guidance for Industry - Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing, Current Good Manufacturing Practice (2004)
4. EudraLex Volume 4 EU Guidelines to Good Manufacturing Practice Medicinal Products for Human and Veterinary Use Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Products (Minuta v.12, emitida em fevereiro de 2020)
5. EN 14885:2018 Chemical Disinfectants and Antiseptics. Application of European Standards For Chemical Disinfectants and Antiseptics
6. EPA Product Performance Test Guideline, OCSPP 810.2100, Sterilants, Sporicides, and Decontaminants, Guidance for Efficacy Testing, [EPA 712-C-17-003]
7. United States Pharmacopoeia (USP) chapter 1072 Disinfectants and Antiseptics
8. The Code of Federal Regulations CFR Title 21 - Food and Drugs: Parts 1 to 1499
9. PICS GUIDE TO GOOD MANUFACTURING PRACTICE FOR MEDICINAL PRODUCTS ANNEXES PE 009-14
10. ISO 14644 Part 5 Cleanrooms and associate controlled environments - Part 5: Operations, 2004
11. Royal Pharmaceutical Society. Quality Assurance of Aseptic Preparation Services: Standards. Part A 5th Edition 2016
12. EN 16615 Chemical disinfectants and antiseptics – Quantitative test method for the evaluation of bactericidal and yeasticidal activity on non-porous surfaces with mechanical action employing wipes in the medical area (4-field test) – Test method and requirements (phase 2, step 2)
13. Pharmaceutical and Healthcare Sciences Society (PHSS) Technical Monograph 20 Bio-Contamination characterisation, control, monitoring and deviation management in controlled / GMP classified areas
14. Center for Disease Control and Prevention (CDC) Guideline for Disinfection and Sterilization in Healthcare Facilities (2008)
15. Product Performance Test Guideline, OCSPP 810.2000, General Considerations for Testing Public Health Antimicrobial Pesticides, Guidance for Efficacy Testing, [EPA 712-C-17-002]
16. Parenteral Drug Association (PDA) Technical Report No. 70. The Fundamentals of Cleaning and Disinfection Programs for Aseptic Manufacturing Facilities (2015).
17. Pharmig Guide to Disinfectants and their use in the Pharmaceutical Industry (2017)
18. West AM, Teska, PJ, Oliver HF; There is no additional bactericidal efficacy of Environmental Protection Agency registered disinfectant towelettes after surface drying or beyond label contact time. Am J Infect Control 2019; 47: 27-32